高效液相色譜儀是一種基于色譜技術的分析儀器,具有高分離能力、高靈敏度和廣泛的應用范圍。它在化學、生物、制藥、環境和食品等領域中扮演著重要的角色?;谝合嗌V技術,通過樣品在固定相上的分配和吸附作用來實現分離。它利用高壓泵將流動相(溶劑)推動通過色譜柱,樣品溶液通過柱時,不同成分因為在固定相上的相互作用力不同而分離出來。通過調整流動相的性質和梯度條件,可以實現對復雜樣品的高效分離。
1、高壓輸液系統:
HPLC采用高壓泵來推動流動相通過色譜柱,以實現快速、高效的分離。高壓泵的輸出壓力通常在4.7×10^7Pa至4.4×10^7Pa之間,流速可調且穩定。這種高壓輸液方式能夠降低樣品在色譜柱中的擴散效應,加快其在柱中的移動速度,從而提高分辨率和回收率。
2、進樣系統:
進樣系統一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量恒定,有助于提高分析樣品的重復性。進樣器應具有微量進樣功能,且進樣操作簡便、快速。常見的進樣方式包括閥進樣和自動進樣器裝樣。
3、色譜柱:
色譜柱是HPLC的核心部件,用于分離樣品中的各組分。色譜柱內部填充有固定相,不同組分在固定相和流動相之間的分配系數不同,從而實現分離。色譜柱的長度一般為10~50cm,內徑為2~5mm,由優質不銹鋼或厚壁玻璃管等材料制成。固定相的粒度通常為5~10μm,具有高柱效但會引起高阻力。
4、檢測系統:
檢測器將色譜柱連續流出的樣品組分轉變成易于測量的電信號,被數據系統接收并得到樣品分離的色譜圖。常見的檢測器有紫外-可見光檢測器、熒光檢測器、電導檢測器等,可根據不同物質的吸收、發射或電導特性進行檢測。
5、數據處理系統:
數據處理系統用于處理記錄儀記錄的信號,進行色譜峰識別、定量和定性分析等。該系統應具有強大的數據處理能力和友好的用戶界面。
6、其他輔助系統:
包括流動相儲存器、脫氣器、梯度洗脫裝置等。流動相儲存器用于儲存流動相,通常為高壓密封容器,可確保流動相的純度和穩定性。脫氣器用于防止流動相從色譜柱內流出時釋放出氣泡進入檢測器,從而引起噪聲。梯度洗脫裝置可在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成增加洗脫能力。